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大鼠E鈣黏蛋白上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒實(shí)驗說(shuō)明書(shū)
以下是天津本生關(guān)于大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒的實(shí)驗說(shuō)明書(shū)要點(diǎn)整理：
一、實(shí)驗原理
采用雙抗體夾心法：用純化的大鼠E-Cad抗體包被微孔板，依次加入樣本抗原和HRP標記的抗體，形成復合物后通過(guò)TMB顯色，顏色深淺與樣本中E-Cad濃度正相關(guān)。
二、試劑盒組成
預包被抗體的96孔板
標準品(通常含400ng/ml凍干品，需用稀釋液重構)
生物素標記檢測抗體、HRP標記親和素
洗滌緩沖液(需蒸餾水稀釋)
TMB底物溶液及終止液
三、操作步驟
樣本準備?
血清/血漿：離心去除顆粒，避免反復凍融。
組織勻漿：建議稀釋5,000倍后檢測。
標準品稀釋?
按說(shuō)明書(shū)梯度稀釋(如400→200→100→50→25→12.5→6.25 pg/ml)，空白孔用稀釋液作為0標準。
加樣與孵育?
每孔加50μL標準品或樣本，再依次加入檢測抗體(100μL)，37℃孵育60分鐘。
洗板5次(手工洗板需拍干，避免交叉污染)。
顯色與終止?
每孔加底物A/B各50μL，避光反應15分鐘。
加入終止液后15分鐘內測450nm OD值。
四、注意事項
樣本處理?：溶血或脂血樣本需離心澄清;細菌污染可能導致假陽(yáng)性。
實(shí)驗環(huán)境?：避免陽(yáng)光直射，顯色后需避光。
質(zhì)量控制?：建議標準品和樣本做復孔，計算平均值。
保存條件?：開(kāi)封后未用完板條需密封干燥保存;試劑長(cháng)期不用需-20℃存放。
五、結果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制曲線(xiàn)，用四參數擬合方程計算樣本濃度。
六、技術(shù)參數
檢測范圍?：通常為6.25-400 pg/ml(不同品牌可能有差異)。
靈敏度?：<15 pg/ml。
特異性?：不與大鼠其他蛋白交叉反應。
注：以上資料僅供參考，如需完整說(shuō)明書(shū)，建議聯(lián)系供應商獲取隨貨文件。
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