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　　人表皮生長(cháng)因子(EGF)ELISA試劑盒使用說(shuō)明

　　BS-0182  人表皮生長(cháng)因子(EGF)ELISA試劑盒

　　實(shí)驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)，通過(guò)將純化的EGF捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標準品和HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色，在HRP酶催化下產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，酸化后轉為黃色，顏色深度與樣本中EGF濃度呈正相關(guān)，最終在450nm波長(cháng)下測定OD值。

　　試劑盒組成與樣本處理

　　樣本類(lèi)型?：適用于血清、血漿(EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝)、組織勻漿、細胞培養上清及其他生物液體

　　樣本保存?：2-8℃可保存48小時(shí)，長(cháng)期保存需-20℃或-70℃冷凍，避免反復凍融

　　樣本稀釋?：尿液至少需20倍稀釋(10μl樣本+190μl稀釋液)，血清/血漿可能需要預實(shí)驗確定稀釋倍數

　　標準品配制?：使用前加1ml蒸餾水配成20ng/ml溶液，通過(guò)系列倍比稀釋(從900μl稀釋液開(kāi)始)建立標準曲線(xiàn)

　　檢測程序

　　加樣?：空白孔加50μl稀釋液，其余孔加50μl標準品或待測樣本，37℃孵育40分鐘

　　洗滌?：使用1×洗滌液充分洗滌4-6次，每孔350μl，每次浸泡1-2分鐘后拍干

　　加檢測抗體?：空白孔加100μl抗體稀釋液，其余孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘

　　加SABC復合物?：每孔100μl，37℃孵育20分鐘

　　顯色?：加100μl TMB底物，37℃避光反應10-20分鐘(顯色時(shí)間需根據實(shí)際情況調整)

　　終止與讀數?：每孔加100μl終止液，30分鐘內在450nm波長(cháng)測定OD值

　　技術(shù)參數

　　檢測范圍?：3.9-250pg/mL(典型范圍，不同品牌有差異)

　　靈敏度?：1.53-1.6pg/mL

　　重復性?：板內變異系數<10%，板間變異系數<10%

　　特異性?：與人EGF類(lèi)似物無(wú)明顯交叉反應

　　注意事項

　　所有試劑使用前需恢復至室溫，液體組分充分混勻

　　嚴格避免泡沫產(chǎn)生和交叉污染，不同濃度樣本需更換槍頭

　　洗滌步驟對結果準確性至關(guān)重要，需確保洗滌充分

　　底物溶液變?yōu)樗{色表明失效，不得使用

　　剩余板條應立即密封保存于干燥環(huán)境，建議1個(gè)月內用完

　　實(shí)驗廢棄物應按傳染物規范處置

　　建議標準品和樣本做雙孔檢測，每次實(shí)驗都需建立標準曲線(xiàn)

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