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酶標條正確使用方法的詳細指南
以下是關(guān)于酶標條正確使用方法的詳細指南,結合實(shí)驗操作關(guān)鍵步驟和注意事項:
一、酶標條的拆裝與方向控制
拆裝技巧?
拆卸?:從板條正面兩端輕輕向上掰動(dòng)后摳取,嚴禁單側強行掰取,避免斷裂?。
安裝?:注意板條兩端的方形和半圓形設計,半圓端需對準板框凸起卡槽,裝反可能導致密封不嚴或檢測誤差?。
固定?:裝入后需按壓兩側和中間部位,確保板條壓實(shí),避免液體滲漏?。
方向標識?
酶標板通常標有字母(A-H)和數字(1-12)定位孔位,操作時(shí)需將板條缺口對準右上角放置?。
二、液體處理與拍干操作
加樣與拍干?
加樣后需垂直向下拍打酶標板,保證液體甩干程度一致。斜角拍打會(huì )導致受力不均,影響結果?。
使用振蕩器時(shí),需單手按住板子調節檔位,避免液體分布不均影響吸光度讀數?。
洗滌注意事項?
手工洗滌時(shí)需用去離子水清洗加樣槽,防止HRP酶污染;洗板機清洗建議5次,確保殘留物去除?。
三、實(shí)驗流程關(guān)鍵步驟
顯色與終止?
TMB顯色液需現配現用(A/B液等比例混合),每孔加90-100μl,避光孵育15分鐘(37℃)。顯色過(guò)度時(shí)可提前終止?。
終止液(如50μl/孔)加入后顏色由藍變黃,需10分鐘內完成450nm吸光度檢測?。
讀數設置?
酶標儀波長(cháng)通常設為450nm,若儀器支持,可附加570nm或630nm校正波長(cháng)以減少非特異吸收?。
四、常見(jiàn)問(wèn)題與維護
故障處理?
讀數異常時(shí)需檢查濾光片設置、光源清潔度,或重新校準儀器?。
背景過(guò)高可能是封閉不充分或洗滌不凈,需優(yōu)化封閉時(shí)間和洗滌次數?。
儲存條件?
未使用的酶標條需密封避光保存(2-8℃),避免受潮或暴露失效?。
通過(guò)規范操作和細節控制,可顯著(zhù)提升實(shí)驗結果的準確性和重復性。
注:以上資料僅供參考,實(shí)驗前建議通過(guò)小樣測試驗證膜性能?。
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