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如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實(shí)操指南
更新時(shí)間:2025-06-17瀏覽:200次

  如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實(shí)操指南

  以下是天津本生使用Roche 480配套PCR板時(shí)避免交叉污染與信號干擾的詳細操作指南:

  一、實(shí)驗前準備?

  耗材選擇?

  必須使用與LightCycler® 480匹配的96孔PCR板(推薦半裙邊白色板)。

  選擇專(zhuān)用光學(xué)封板膜,確保密封性并減少熒光背景干擾。

  滅菌處理?

  新開(kāi)封的PCR板需紫外線(xiàn)照射15分鐘或高壓滅菌(若材料允許)。

  操作臺和移液器需用75%乙醇擦拭消毒。


PCR板.png


  二、反應體系配置?

  加樣規范?

  反應液需在冰上配制,避免高溫降解。

  每孔體積嚴格控制在20μL(誤差<1μL),使用低吸附吸頭分裝。

  防污染措施?

  分區操作:核酸提取、體系配制、PCR擴增需在不同超凈臺進(jìn)行。

  每加樣一次更換吸頭,避免氣溶膠污染。

  三、封板與離心?

  密封操作?

  封膜時(shí)需覆蓋孔口,輕壓邊緣排除氣泡。

  禁止使用記號筆在板或膜上標記(可能干擾熒光信號)。

  離心參數?

  2000 rpm離心30秒,確保液體集中至孔底。

  四、儀器操作?

  裝板注意事項?

  確認板底清潔干燥,避免指紋或灰塵影響光學(xué)檢測。

  放入儀器時(shí)對準托架卡槽,避免傾斜。

  程序設置?

  熱蓋溫度設為105°C,防止蒸發(fā)。

  熒光采集通道需與染料匹配(如FAM通道用于SYBR Green)。

  五、實(shí)驗后處理?

  數據保存?

  使用光盤(pán)刻錄原始數據,避免U盤(pán)傳輸導致文件損壞。

  耗材廢棄?

  PCR板為一次性使用,禁止剪開(kāi)重復利用。

  實(shí)驗結束后立即帶離實(shí)驗室,按生物危害廢物處理。

  關(guān)鍵問(wèn)題規避?

  交叉污染?:

  操作全程佩戴無(wú)粉手套;

  每批次實(shí)驗預留至少2孔陰性對照。

  信號干擾?:

  白色PCR板可減少背景熒光;

  避免強光直射反應板。

  通過(guò)規范操作流程和嚴格分區管理,可顯著(zhù)提升實(shí)驗結果可靠性。

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  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢(xún)技術(shù)老師。

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