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酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)原理
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是一種基于抗原-抗體特異性結合與酶催化顯色的免疫檢測技術(shù)，其核心原理可分為以下關(guān)鍵步驟：
一、固相載體包被
抗原/抗體固定化?
將已知抗原或抗體吸附于固相載體(通常為聚苯乙烯微孔板)表面，并保持其免疫活性
封閉處理?
使用無(wú)關(guān)蛋白(如BSA)封閉未結合位點(diǎn)，減少非特異性結合
二、特異性結合反應
樣本孵育?
加入待測樣本，目標分子(抗原或抗體)與固相載體上的對應結合物形成免疫復合物
洗滌分離?
通過(guò)多次洗滌去除未結合的游離成分，確保反應特異性
三、酶標記與信號放大
酶標二抗/抗原?
加入酶標記的抗體或抗原(如HRP標記)，與目標分子特異性結合
催化顯色?
加入底物(如TMB)后，酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顏色深淺與目標物濃度成正比
四、檢測與定量
光學(xué)測量?
使用酶標儀測定吸光度(OD值)，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算目標物濃度
靈敏度優(yōu)勢?
酶的高效催化作用可放大信號，檢測限可達皮摩爾級別
常見(jiàn)方法類(lèi)型
類(lèi)型 特點(diǎn) 適用場(chǎng)景
直接法? 酶標一抗直接結合抗原，步驟簡(jiǎn)單但靈敏度較低 單一抗原檢測
間接法? 使用酶標二抗放大信號，提高靈敏度 抗體檢測(如血清學(xué))
夾心法? 需兩種特異性抗體分別捕獲和檢測抗原，特異性最高 復雜樣本中的微量抗原
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢(xún)技術(shù)老師或供應商。
注：實(shí)際應用中需根據檢測目標選擇方法類(lèi)型，并優(yōu)化包被濃度、封閉條件等參數。以上資料僅供參考具體請咨詢(xún)技術(shù)老師或供應商。
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